Купить pritelivir

Купить pritelivir

Переезд склада в Европу.
Реализуем препараты от гепатита С в России по закупочной цене - ликвидация склада
Перейти на сайт

No Evidence of Pritelivir Resistance Among Herpes Simplex Virus Type 2 Isolates After 4 Weeks of Daily Therapy
Источник: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4918824/

P. T. E. и A. B. в равной степени способствовали этой работе.

Задний план. Pritelivir является новым ингибитором геликазы-primase в клиническом развитии для лечения инфекций типа 2 вируса простого герпеса (HSV-2). В доклинической работе мутации, опосредованные резистентностью, были идентифицированы в геноме ВПГ-2 в 3 локусах в гене UL5 и 1 локусе в UL52.

Методы. Чтобы оценить, приводит ли ежедневное лечение прителивиром к появлению мутантов, опосредующих резистентность, мы проанализировали штаммы ВПГ-2, обнаруженные в образцах половых мазков у участников испытаний, которые были рандомизированы для приема различных доз прителивира. Мы секвенировали области резистентности из 87 образцов участников, гена UL5 в 73 образцах от 44 участников и гена UL52 в 71 образце от 43 участников.

Результаты. Мы не обнаружили никаких доказательств того, что прителивир индуцировал известные резистентные к опоре мутации или для изменения аминокислот в других локусах. В изоляте HSV-2 одного участника мы обнаружили ранее неидентифицированную мутацию, близкую к предполагаемой резистентности к резистентной области в UL5, и впоследствии определяли восприимчивость in vitro к прителивиру. Мы описали мутации из 32 культивируемых изолятов ВПГ-2, которые ранее были восприимчивы к прителивиру in vitro, и выявили несколько новых мутаций, которые, скорее всего, отражают существующие изменения в циркулирующем ВПГ-2.

Выводы. Это исследование демонстрирует доказательства сохранности восприимчивости HSV-2 к прителивиру у иммунокомпетентных лиц после ежедневной терапии на срок до 28 дней.

Pritelivir (также известный как BAY 57-1293 и AIC316) относится к новому классу противовирусных соединений — ингибиторам геликазы-primase (HPI), которые предотвращают синтез de novo вирусной ДНК путем ингибирования комплекса геликаза-примаза [1] , Функционально как UL5, так и UL52 вместе с дополнительным белком UL8 образуют ферментный комплекс helicase-primase, молекулярную мишень прителивира [2]. В отличие от аналогов нуклеозидов, которые в настоящее время являются основой терапии инфекций вируса простого герпеса (ВПГ), прителивир не требует активации вирусной тимидинкиназой в клетке, инфицированной ВПГ.

Инфекции HSV, устойчивые к нуклеозидным аналогам, редки у иммунокомпетентных людей, но их частота увеличивается у пациентов с ослабленным иммунитетом [3]. Мутации, опосредующие резистентность к нуклеозидным аналогам, находятся в гене, кодирующем тимидинкиназу, и / или ген, кодирующий ДНК-полимеразу. Все опосредующие резистентные мутации к прителивиру, идентифицированные до настоящего времени in vitro, расположены либо в одном положении аминокислоты в вирусной примасе UL52 (аминокислота 906), либо внутри / ниже четвертого функционального мотива вирусной геликазы UL5 (консервативный геликазный мотив , аминокислоты 341-355, фиг. 1) [4, 5]. На сегодняшний день не обнаружено резистентного изолята вируса или штамма, для которого лекарственная устойчивость против прителивира или других HPI была опосредована изменением аминокислоты в UL8.
Рисунок 1. Локации известных резистентных мутаций ДНК в UL5 и UL52 по сравнению с мутациями, идентифицированными с помощью анализа ДНК-образцов образцов мазка у участников исследования. Эти мутации относятся к консенсусу. Были идентифицированы четыре различные мутации ДНК в области UL5, связанные с резистентностью к ингибитору геликазы-primase (HPI) и 2 различными мутациями в области UL52, связанной с резистентностью к HPI (черные полосы), с только 1 несинхронной мутацией, расположенной в UL5 (H334R; оранжевый бар). Для сравнения, известные резистентные к HPI мутации C1023A (N341K), G1051C (G351R) и G1065T (K355N) в UL5 и G2716A (A906T) в UL52 включены в красный цвет. Однако ни одно из них не может быть обнаружено ни в одном из участников процесса. Стрелки и числа над усиленными областями указывают размер и расположение каждой области сопротивления HPI. Эта цифра доступна в черно-белом режиме в печати и в цвете онлайн.

Было показано, что при дозаторном исследовании у лиц с генитальной инфекцией HSV типа 2 (HSV-2) прителивир снижает уровень вирусной проливы и рецидив генитальных поражений [6]. Здесь мы сообщаем результаты вторичной цели этого исследования: мониторинг молекулярных сигналов лекарственной устойчивости в течение 28 дней терапии.

Письменное информированное согласие было получено от всех участников исследования. При проведении клинических исследований соблюдались руководящие принципы проведения экспериментов с людьми в Департаменте здравоохранения и социальных служб. Более подробная информация приведена в рукописи первичных результатов [6].

В исследовании, посвященном дозировке, лица с генитальной инфекцией HSV-2 обрабатывали 5 мг, 25 мг или 75 мг прителивира один раз в день, 400 мг прителивира один раз в неделю или плацебо в течение 28 дней. Участники ежедневно получали образцы мазка генитальной области для обнаружения ДНК ВПГ с помощью проверенного в реальном времени количественного анализа полимеразной цепной реакции (ПЦР), как описано ранее [7, 8].

Для всех участников, которые получали по меньшей мере 1 дозу пробного лекарства (плацебо или прителивир) и у кого был адекватный выход вирусной ДНК, мы секвенировали области генов UL5 и UL52, которые, как известно, переносят мутации, опосредующие фенотипическую резистентность к HPI in vitro [ 9-14]. Секвенирование охватывало область пар с 300 основаниями в UL5 (нуклеотиды 841-1140) и парную область 200 оснований в UL52 (нуклеотиды 2601-2800). Для секвенирования были выбраны только образцы, содержащие ≥5000 копий / мл. Десять микролитров каждого образца ДНК использовали для ПЦР с высокой точностью. Для получения продуктов ПЦР в соответствии с инструкциями производителя использовались праймеры, фланкирующие регионы, и реагенты высокой точности верности TaqDNA Polymerase (Invitrogen, Carlsbad, California). После очистки колонки с помощью набора QIAquick PCR Purification Kit (Qiagen, Valencia, California) продукты PCR были отправлены в Qiagen (Hilden, Germany) для секвенирования внутренними праймерами (дополнительная таблица 1) с использованием технологии секвенирования циклов BigDye Terminator [15, 16 ]. Данные секвенирования были согласованы с данными для эталонного штамма HSG-2 HG52 (NC_001798.1 [17]), используя приложение для анализа последовательности Sequencher 4.10. Результаты последовательности были приняты только в том случае, если все основания в регионе были секвенированы по меньшей мере дважды независимыми реакциями секвенирования. Нуклеотидные последовательности были выровнены по кодону и переведены в аминокислотные последовательности, используя онлайн-инструмент биоинформатики EMBOSS Transeq [18, 19], а консенсусные последовательности нуклеотидов и аминокислот были рассчитаны как ссылки для последующего анализа.

Полные гены UL5 и UL52 были секвенированы у участников с уровнем ДНК HSV ≥50 000 копий / мл. В участниках с несколькими образцами для выбора последовательности были выбраны только первые и последние образцы. Одна праймерная пара, фланкирующая весь ген UL5, была выбрана для получения ампликонов пар пары 2952-base для секвенирования. Две пары праймеров, перекрывающиеся 1528 парами оснований и с продуктами ПЦР пар оснований 2524 и 2588 соответственно, были выбраны для получения ПЦР-продуктов для секвенирования гена UL52 (дополнительная таблица 2). Одиннадцать праймеров использовали для последовательности UL5, и для праймера UL52 использовали 15 праймеров. Из-за секвенирования артефактов на границе отдельно усиленных половин UL52 анализ исключал нуклеотиды 1480-1488 и соответствующие аминокислоты 494-496 и обрабатывал как отсутствующие данные любые промежутки, простирающиеся от этой области до смежной пары аминокислот. Условия ПЦР, очистка ПЦР-продуктов, секвенирование и анализ последовательности были такими же, как описано для секвенирования области, связанной с резистентностью к HPI. Результаты последовательности каждого гена принимались только в том случае, если все основания внутри гена были секвенированы по меньшей мере дважды независимыми реакциями секвенирования. Последовательности были представлены в GenBank под номерами доступа KP019007-191.

Восприимчивость штаммов ВПГ-2 к прителивиру определяли анализом редукции бляшек в клетках Веро [12]. Вкратце, около 100 единиц образования бляшек вируса инокулировали в 12-луночные планшеты (Nunc, Roskilde, Denmark), содержащие приблизительно 3 × 105 клеток Vera / лунку. После адсорбции в течение 60 мин при 37 ° С в увлажненной атмосфере с 5% СО2 в каждую лунку добавляли модифицированный Дульбекко средний слой Орел (содержащий 1% новорожденной телячьей сыворотки и карбоксиметилцеллюлозу с высокой плотностью и различные концентрации прителивира). Бляшки фиксировали, окрашивали и перечисляли после инкубации в течение 48 часов. Среднее количество бляшек при каждой концентрации (выраженное в процентах от среднего значения контрольной лунки, которое не содержало лекарственного средства) было отложено против концентрации лекарственного средства log10 и оценивалось с помощью GraphPad Prism 4.

Чтобы подтвердить обнаружение множественных штаммов HSV-2 у пациентов 5d04 и 5d19 с помощью последовательности UL5 и UL52, было выполнено 4 разных ddPCR на всех положительных образцах, собранных у этих 2 участников исследования. Реакции ddPCR проводили на Bio-Rad QX100 Droplet Digital PCR System, как описано ранее [20]. Условия термоциклирования были следующими: 1 цикл при 94 ° C в течение 10 минут, 35 циклов при 94 ° C в течение 30 секунд и 1 цикл при 60 ° C в течение 1 минуты с последующим 1 циклом при 98 ° C в течение 10 минут и заканчивающийся при 4 ° С. Два из 4 анализов обнаруживают однонуклеотидные изменения в положениях 48034 (T / C) в UL24 и 64473 (G / C) в UL30 контрольной последовательности HSV-2 JN561323. Другие 2 анализа обнаруживают изменения в 2 разных областях в UL39. Последовательности праймеров и зондов показаны в дополнительной таблице 3.

Во время испытания притевивира в фазе 2 [6] образцы из образцов половых органов 8993 были собраны у 155 подходящих участников. Из них 823 образца мазка (среднее время сбора после начала лечения, 22 дня, диапазон 1-44 дня), собранные у 87 субъектов (20 в группе плацебо и 67 в одной из 4 дозированных групп, дополнительная таблица 4) , содержало количество HSV-2 ≥5000 копий / мл и подвергалось секвенированию области резистентности. Из 823 образцов 688 (84%) из 80 пациентов прошли успешную секвенирование гена UL5 и 775 (94%) из 83 пациентов прошли успешное секвенирование гена UL52 (рисунок 2). Консенсусные последовательности нуклеотидов как для UL5, так и для UL52 были идентичны последовательностям этих генов из эталонного штамма HG52. Все изменения, о которых сообщается здесь, являются вариациями относительно консенсуса; последовательности этих 2 областей идентичны по всем образцам, собранным от каждого участника, включая образцы, собранные до введения прителивира.
Рисунок 2. Вариация в областях резистентности к резистентности к ингибиторам helacase-primase UL5 и UL52 (HPI). Эта блок-схема показывает фракцию образцов, из которых регионы каждого гена, связанные с резистентностью к HPI, были успешно секвенированы. Только одна аминокислотная мутация наблюдалась в любой из последовательностей областей устойчивости HPI. Все аминокислотные последовательности от одного участника были идентичными. Сокращения: HSV-2, вирус простого герпеса типа 2; ПЦР, полимеразной цепной реакции.

Используя консенсус нуклеотидов в качестве контрольной последовательности, изменения нуклеотидов в области устойчивости UL5 наблюдались в образцах, собранных у 5 участников исследования, включая 1 получателя плацебо и 4 получателя прителивира в 3 группах лечения (таблица 1). Все изменения были синонимами, за исключением выборок, собранных от одного участника, который получал 5 мг прителивира один раз в день. Все 23 образца HSV-2 от этого участника, включая образец, собранный на исходном уровне (1-й день), до начала терапии прителивира и образец, собранный на 2-й день после инициации прителивира, имели одно и то же единственное нуклеотидное изменение и соответствующее изменение аминокислоты относительно к консенсусу H334R. Поскольку это изменение аминокислоты было близко к четвертому функциональному мотиву UL5, мы оценили изоляцию этого участника для потенциальной устойчивости к прибеливиру, используя анализ редукции бляшек [21]. Поскольку этот изолят был восприимчивым к прителивиру, мутация H334R не считалась резистентной (рис. 3). В области резистентности UL52 синонимичное изменение консенсуса наблюдалось у 2 участников (1 получатель плацебо и 1 участник принимали прителивир 25 мг один раз в день); никакие нелинейные изменения не были найдены ни в одном из образцов. Хотя эти сайты были отмечены ранее, восприимчивость варианта H334R ранее не сообщалась [6].
Таблица 1.Mutations относительно консенсуса в регионах UL5 и UL52, связанных с резистентностью ингибитора Helicase-Primase, идентифицированной в ориентированной на регион последовательности

a Относительно консенсуса.

Восприимчивость лабораторного штамма вируса простого герпеса типа 2 (HSV-2) Bry (A) и клинического изолята, несущего аминокислотный обмен UL5-H334R (B), к прителивиру, как определено анализом восстановления бляшек (PRA). 50% эффективных доз (EC50) измеряли с помощью PRA. Бляшки подсчитывали после 48-часовой инкубации. Ось оси показывает количество бляшек по сравнению с контролем (без наркотиков) в процентах. Ось x показывает концентрацию прителивира. Точки данных представляют собой средства из 6 повторов со стандартными отклонениями. Эти результаты получены из 1 репрезентативного эксперимента.

Мы секвенировали все отсчетные рамки UL5 и UL52 с последнего образца с ПЦР-положительным мазком, полученного во время лечения, и либо образец образца для предварительной обработки (если положительный), либо первый образец мазка, полученный во время лечения, при условии адекватного выхода вирусной ДНК. 582 экземпляра из 79 участников исследования были положительными по HSV-2 при ≥50 000 копий / мл, порогом для секвенирования целых генов. Мы исключили 189 образцов, которые были собраны у субъектов, назначенных группе плацебо, и 190 образцов, которые были собраны через 1 день после введения последней дозы исследуемого препарата. Два дополнительных образца от 1 участника были исключены после того, как они были подтверждены как положительные для ВПГ-1. Сорок пять участников предоставили оставшиеся 203 образца, которые имели право на секвенирование целых генов. Среди этих 45 участников 15 имели только 1 образец, и мы секвенировали 2 образца из каждого из оставшихся 30. Среднее время сбора после начала лечения для этих образцов (или последняя дата для парных образцов), а также для образцов из 42 участников с успешными последовательными образцами после начала лечения было 11 дней (диапазон, 1-29 дней). Среднее число дней между сбором парных экземпляров составляло 3 (диапазон, 1-39 дней).

Из 75 доступных экземпляров 73 (97%) были успешно секвенированы для всего гена UL5. Всего у 15 участников было 1 образец, в котором HSV-2 UL5 был полностью секвенирован, а 29 имели 2 образца, в которых HSV-2 UL5 был полностью секвенирован (дополнительные таблицы 5 и 6). Только 2 участника, оба назначенные группе лечения 5 мг один раз в день, имели вирус, который показал любую вариацию между образцами в гене UL5 между первым и последним положительным образцом мазка (дополнительная таблица 7). В обоих случаях образцы собирали после базовой линии (дни 7 и 15 и 13 и 15 дней соответственно). Мы использовали ddPCR для оценки этих образцов для полиморфизмов, уникальных для разных штаммов HSV-2. Этот анализ включал анализ однонуклеотидного полиморфизма нескольких дополнительных генов HSV-2, включая UL39, и указывал, что оба этих участника были инфицированы двоеточием (дополнительная таблица 8), подтверждая гипотезу о том, что эти полиморфизмы отражают предшествующую вариацию последовательности между вирусными штаммами, а не вызванной наркотиками вариации.

Со временем циркулирующий вирусный вирус HSV-2, как ожидается, будет развиваться от эталонной последовательности HG52. Мы обнаружили, что консенсус нуклеотидных последовательностей UL5 был идентичен последовательности HG52, за исключением трех позиций с синонимическими мутациями относительно HG52: C1281T (C в 28% и T в 72%), T1965G (T в 5% и G в 95 %) и T2100C (T в 3% и C в 97%). Сравнивая последовательности UL5 участников исследования со всеми доступными образцами с консенсусом, мы идентифицировали 8 сайтов с несинхронными мутациями, все из которых включали разницу в один нуклеотид (дополнительная таблица 9). Один из них, H334R, также был обнаружен в анализе последовательности фрагментов UL5 и был подтвержден как восприимчивый к прителивиру. Три наблюдались у> 1 человека: R415H наблюдалось у 2 участников, A739T в 7 и I763V в 9. Все 7 человек с заменой A739T также имели замену I763V, как показано в дополнительном рисунке 1A (P < .0001 by=""> .2, точным тестом Фишера для всех сравнений, дополнительная таблица 10), что согласуется с наблюдением, что ни один из участников этого рандомизированного исследования не обнаружил вариацию последовательности между первыми и последние доступные образцы (за исключением 2, последовательности которых имели разные штаммы, как обсуждалось выше).

Мы также секвенировали гены UL5 HSV-2 из 32 образцов, которые, как было определено ранее, были восприимчивы к прителивиру с помощью анализа восстановления бляшек, как описано ранее [21]. Вкратце, это клинические изоляты, полученные в культурах герпетических поражений у прителивир-наивных людей в 1998-2004 годах в Сиэтле. Консенсус нуклеотидов этих образцов был идентичен консенсусу этих пробных последовательностей. Мы идентифицировали 2 положения аминокислот — S458G и Y573H — с несинхронными мутациями относительно консенсуса (дополнительная таблица 8), которые не были обнаружены в последовательностях участников исследования. Из 8 участков аминокислот с любой вариацией, наблюдаемой у участников исследования, следующие 4 не были обнаружены в восприимчивых изолятных последовательностях (включая последовательность участников, которая была восприимчива): R415H, D513N, S605P и S689T.

Только 2 участника продемонстрировали вариацию между образцами в гене UL52 между первым и последним положительными образцами мазка, и это были те же 2 участника, у которых мы обнаружили множественные штаммы HSV-2 (дополнительная таблица 7). Из-за высокого содержания GC в гене UL52 только 46 из 75 экземпляров (61%) были успешно секвенированы для UL52 (дополнительные таблицы 11 и 12). Двадцать пять из 75 экземпляров (33%) были неполностью секвенированы, а 4 (5%) не выполняли секвенирование UL52. Среди 33 участников, у которых было по крайней мере 1 образец с полной последовательностью HSV-2 для UL52, 13 имели 2 образца с полной последовательностью и 20 имели только 1 образец. Чтобы в полной мере использовать доступные данные, мы проанализировали набор данных, содержащий 71 последовательность (полностью и не полностью упорядоченную) из вирусов из 43 участников.

Консенсус нуклеотидных последовательностей UL52 был идентичен последовательности HG52, за исключением 6 позиций, следующие 3 из которых имели несинхронные мутации относительно HG52: T169C, соответствующие аминокислотной вариации S57P (T в 3% и C в 92%; 3 последовательности с отсутствующими данными); G430A, соответствующий аминокислотной вариации V144I (G в 3% и А в 91%; 4 последовательности с отсутствующими данными); G653C, соответствующий аминокислотной вариации G218A (C в 94%; 4 последовательности с отсутствующими данными); и вставленный кодон при — 2140GAC, соответствующий аминокислотной вставке -714D. 19 последовательностей с вставкой кодонов также имели последовательные изменения в 2 фланкирующих кодонах, причем все 19 имели мутацию GGT — CCC2137GGCGACGAC, соответствующую синонимичной мутации в положении аминокислоты G713 и вариации P714DD замены-введения. Другие 52 последовательности соответствовали HG52 одинаково в этом положении. Следующие 2 положения консенсуса имели синонимичные нуклеотидные мутации относительно HG52: A837G (G в 100%) и T2862C (T в 19% и C в 81%). Они приведены в координатах HG52; последний составляет T2865C относительно консенсуса.

Сравнивая все доступные последовательности UL52 с консенсусом, мы определили 20 сайтов с неоновой аномальной вариацией, включая мутацию замещения-вставки, P714DD, которая показала полную связь. Из этих 20 сайтов 5 наблюдались в вирусах у нескольких лиц. Изменение T495S, наблюдаемое в образцах из 14 участников, охватывает область с низким разрешением последовательности, которую мы обозначили как исключенный из первичного анализа. Два других изменения, S697L и P714DD, включали> 1 нуклеотидную разницу. За исключением G334S, неисключенные вариации произошли во взаимоисключающих наборах участников (дополнительный рисунок 1B). В наборе данных, ограниченном последовательностью в образце тампона, собранной у каждого участника в самый последний момент времени после прителивира, мы обнаружили следующие 5 аминокислотных сайтов с вариацией: 334, 495, 697, 714 и 715. Как и в UL5 , мы не обнаружили доказательств того, что эти мутации в UL52 отличались группой лечения (P> .2, точным тестом Фишера, для всех сравнений, дополнительная таблица 10).

Мы также секвенировали гены UL52 из 32 восприимчивых последовательностей HSV-2. Консенсус нуклеотидов этих последовательностей был идентичен консенсусу этих последовательностей участников. Мы определили следующие 7 позиций аминокислот с неодинаковым изменением относительно консенсуса (дополнительная таблица 13), которые не были обнаружены в последовательностях участников исследования: E9G, D58N, R119H, R414S, R440C, T518A и L600P. Из 20 сайтов аминокислот с вариацией, наблюдаемой в образцах от участников исследования, 10 не наблюдались в восприимчивых изолятных последовательностях. Один из них, T25A, был обнаружен в последовательности из штамма, который, как мы подтвердили, восприимчив к прителивиру. Остальные 9 были E101K, G312R, R331H, R424M, S459P, A578V, D704G, E719A и N1020H.

Наше исследование первым исследовало, были ли мутации, согласующиеся с резистентностью к HPI, проявляться in vivo у людей, получающих препарат для лечения генитальных ВПГ-2. Используя как полногенное секвенирование комплекса геликаза-примаза, так и целенаправленное секвенирование, мы не обнаружили признаков резистентности штаммов HSV-2 у лиц, получавших различные дозы прителивира. Вместо этого наблюдаемые изменения отражают существовавшее ранее разнообразие штаммов HSV-2 среди субъектов, включенных в исследование. В целом, было обнаружено несколько мутаций относительно консенсуса [22], и никакие изменения в последовательности ВПГ-2 во время лечения не наблюдались у отдельных пациентов. Ни одна из мутаций не попала в область предполагаемого резистентности, кроме одного (UL5 H334R), которая была обнаружена в изоляте HSV-2, полученном от участника исследования в группе 5 мг один раз в день, что, по результатам бляшки , мы решили быть восприимчивыми к прителивиру.

Хотя в этих анализах участвовало относительно небольшое число пациентов, по крайней мере 2 дозы в нашем исследовании были менее оптимальными для ингибирования репликации HSV, что подтверждается стойким вирусным пролитием во время дозирования [6]. Таким образом, утешительно, что быстрый отбор резистентности не наблюдался даже при субоптимальных режимах прителивира. В исследованиях на людях продолжительность доприливира дольше всего составила 28 дней. Таким образом, пока неясно, будет ли длительное использование результатом отбора для сопротивления.

Более того, исследования у пациентов с ослабленным иммунитетом у пациентов с ослабленным иммунитетом в крови отсутствуют. Устойчивость к нуклеозидным аналогам редка у иммунокомпетентных особей с генитальным герпесом, который получает антивирусную терапию, но иногда возникает у пациентов с ослабленным иммунитетом [3, 23]. Неизвестно, будет ли сопротивление в конечном итоге наблюдаться при терапии HPI.

Одним из интересных выводов, которые могут возникнуть в наших исследованиях, было генетическое разнообразие популяции в UL5 и UL52, разнообразие, которое до сих пор не было хорошо описано. В этом исследовании мы секвенировали известные области резистентности к лекарственным средствам из UL5 и UL52 генов из 823 образцов ВПГ-2-положительного образца, собранных в течение периода исследования. В области резистентности к лекарственным средствам UL5 было обнаружено 4 различных мутации ДНК (относительно консенсуса) в образцах, собранных у 5 разных людей. Одна из мутаций была неосуществимой. Эта несинонимальная мутация, как известно, не вызывает резистентности к HPI, и мы экспериментально подтвердили, что изолят HSV-2, содержащий эту мутацию, восприимчив к прителивиру. В области резистентности к лекарственным средствам UL52 мы обнаружили 2 разных мутации в образцах, собранных у двух разных участников исследования, оба из которых были синонимами. Лечение прителивиром, по-видимому, не вызывало или не вызывало мутации в этих 2 областях резистентности к лекарственным средствам, поскольку все последовательности, полученные от одного и того же человека, были идентичными.

Мы также полностью секвенировали ген UL5 изолятов HSV-2 из 73 образцов и гена изолятов UL52 из 46 образцов. У 2 участников мы обнаружили различия между образцами, собранными от одного и того же человека с течением времени. Однако мы подтвердили, что эти различия отражают инфекцию двойными штаммами ВПГ-2, а не вариацию, вызванную обработкой. Мы исчерпывающе идентифицировали все сайты, демонстрирующие любые вариации для каждого гена. Хотя многие из этих вариаций также проявляются в последовательностях изолятов ВПГ-2, которые, как известно, восприимчивы к прителивиру, были обнаружены 4 аминокислотных сайта в UL5 и 9 в UL52 в последовательностях участников исследования, которые не были оценены на устойчивость. Поскольку эти мутации не встречались вблизи предполагаемых резистентных к резистентности областей и, поскольку они, скорее всего, предсказывали популяцию штаммов HSV-2, заражающих участников исследования, маловероятно, что они придают устойчивость. Последовательности могут быть полезны для будущего анализа генов UL5 и UL52 HSV-2, поскольку в ходе испытаний оценивают прителивир и другие ингибиторы геликазы-primase для лечения инфекции HSV.

Дополнительные материалы доступны по адресу: http://jid.oxfordjournals.org. Составив данные, предоставленные автором в интересах читателя, размещенные материалы не копируются и несут исключительную ответственность автора, поэтому вопросы или комментарии должны быть адресованы автору.

Выражение признательности. Мы благодарим Хью Филда за существенный вклад в резистентность ингибитора гелиазы-primase; Хун Се и Григорий Махаирас, для проверки достоверности; и Стейси Селке для управления данными.

Финансовая поддержка. Эта работа была поддержана AiCuris.

Потенциальные конфликты интересов. P. T. E. сообщает о получении грантовой поддержки через свое учреждение от AiCuris. A. B. доклады, касающиеся патентов, связанных с галениками и синтезом лекарственных веществ через AiCuris. C. A. M. и J. J. K. сообщают о получении грантовой поддержки через свое учреждение от AiCuris. A. B., T. G., B. T., S. S., H. R.-S. и H. Z. являются сотрудниками AiCuris. A. B., B. T., H. R.-S. и H. Z. сообщают о наличии опционов на акции в AiCuris. T. W. сообщает о поддержке путешествий от AiCuris и Vical и оказывает поддержку через свое учреждение от AiCuris, Agenus, Genocea и Vical. A. W. сообщает о получении консультационных сборов от AiCuris и Amgen, поддержки путешествий от Vical и предоставления поддержки через свое учреждение из Agenus, Genocea, Gilead и Vical. L. C. сообщает, что является соавтором нескольких патентов, связанных с разработкой вакцины против вируса типа 2 герпеса, и находится в научно-консультативном совете и держит акции (



Источник: rupubmed.com


Добавить комментарий